オーガナイザー
富田 悟志（タイテック株式会社 宣伝企画部 Ｒ＆Ｄ, Marketing）

天然に存在しないRNA型プロテアーゼ阻害剤 （RNAアプタマー）
−生物に依存しないポストバイオテクノロジー-
講師：菊池　洋　先生　（豊橋技術科学大学エコロジー工学系）

　枯草菌のタンパク質分解酵素サチライシン（ズブチリシン）は、工業的にも広く利用されている非常に高活性な微生物菌体外酵素である。核酸との相互作用はないものと思われる。このような高い活性をもつ酵素を阻害するRNAアプタマーを作ることができるであろうか？そのような単純な疑問からサチライシンに対するRNAアプタマーの創製を試みた。両末端18塩基ずつの既知の配列にはさまれた47塩基のランダム配列をもつRNA集団から、サチライシン固定化セファロースを用いて、RNAアプタマーを選択した。このアプタマーはサチライシンに比較的よく結合し、プロテアーゼ活性を阻害する。速度論的解析から、このアプタマーは競争阻害剤として働いており、Ki値は2.5μMであった。同じセリンプロテアーゼであるトリプシンやキモトリプシンに対して、このアプタマーはほとんど阻害作用を示さないことから、特異性の高い阻害剤が創製されたと言える。このことは、天然に存在しないサチライシン−RNA間の相互作用を創製したことになり、将来的にはより高度な酵素の機能変換素子としてのアプタマーの開発が期待できる。今回得られたアプタマーは、微生物プロテアーゼに対する初めてのRNA型阻害剤であり、サチライシンの安定化剤、プロテアーゼ活性の分子スイッチとして機能できるものと期待される。このような、単純なアプタマーの利用についても討論したい。